Реактив для определения глюкозы в крови

Содержание глюкозы в крови – основной биохимический показатель состояния углеводного обмена. Нормальная концентрация глюкозы в крови – 3,5-5,5 (6,4)ммоль/л. Отклонение его от нормы происходит при ряде заболеваний.

Увеличение содержания глюкозы в крови (гипергликемия) наблюдается при сахарном диабете, остром панкреатите, панкреатических циррозах, эмоциональных стрессах, после эфирного наркоза, обильного приема углеводов с пищей, а также при повышении гормональной активности ряда желез (щитовидной, гипофиза, коркового и мозгового слоя надпочечников).

Снижение уровня глюкозы в крови (гипогликемия) встречается при поражении паренхимы печени, нарушении ферментативной активности при распаде гликогена; недостаточной функции щитовидной железы, надпочечников, гипофиза; передозировке инсулина при лечении сахарного диабета, нарушении всасывания углеводов, отравлениях фосфором, бензолом, хлороформом, при недостатке приема с пищей углеводов, после больших потерь крови.

Принцип метода. В основе метода лежит ферментативное окисление глюкозы кислородом воздуха при участии фермента глюкозооксидазы. При этой реакции образуется перекись водорода в количестве эквимолярном окисленной глюкозе. Перекись водорода в присутствии пероксидазы крови окисляет добавленный σ-толуидин, который приобретает синее окрашивание. Интенсивность возникшей окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы и определяется на фотоэлектроколориметре. Метод специфичен для глюкозы.

Исследуемый материал и реактивы

1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор. 5. Ферментно-хромогенная смесь (1таблетка). 6. Антикоагулянт (оксалат натрия, фторид натрия). 7. Калибратор (раствор глюкозы с концентрацией 10ммоль/л). 8. Дистиллированная вода.

А. Приготовление рабочих растворов. 1. Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц. 2. Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды.

Б. Приготовления калибровочной пробы. В пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа.

В. Определение содержания глюкозы в плазме крови. Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0,9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0,1 мл крови (или 0,45 мл и 0,05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа.

Для проведенения анализа на КФК в пробирки внести 2,0 мл рабочего раствора и добавить по 0,2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10мм, и по 0,4 мл – для кюветы с длиной оптического пути 5мм.

При использовании FP-901 в кюветы внести 0,7 мл рабочего раствора и 0,1 мл надосадочной жидкости.

Г. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови. При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

Для кювет с длиной оптического пути 10мм с длиной оптического пути 5мм
Реагенты Опытная проба, мл Калибр. проба, мл Холостая проба, мл Опытная проба, мл Калибр. проба, мл Холостая проба, мл
Рабочий раствор 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
Сыворотка крови 0,02 0,04
Калибратор 0,02 0,04
Вода дистил. 0,02 0,04

Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +37 0 С (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-25 0 С («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную.

После инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10мм при длине волны 500 (490-540)нм. Окраска проб сохраняет стабильность в течение более 4-х часов после окончания инкубации.

Концентрации глюкозы в пробах провести по формуле:

где С – концентрация глюкозы, моль/л; ЕО – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плот.; ЕСТ – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плот.; 10 – концентрация глюкозы в калибраторе, моль/л.

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученный результат и сделайте выводы.

Контрольные вопросы

  1. Какова нормальная концентрация глюкозы (сахара) в крови?
  2. Какие углеводы могут всасываться в тонком кишечнике человека?
  3. Что такое гипергликемия и гипогликемия? При каких состояниях организма наблюдаются гипер- и гипогликемия?

Биохимия липидов

Липиды – биологически важные органические соединения растительного и животного происхождения разнообразной химической структуры, нерастворимые в воде и растворимые в малополярных органических растворителях (эфир, спирт, хлороформ, ацетон и др.).

Липиды – важная составная часть пищевых продуктов не только вследствие высокой энергетической ценности, но также и потому, что в натуральных пищевых жирах содержатся жирорастворимые витамины и «незаменимые» жирные кислоты (полиненасыщенные), которые являются предшественниками таких биологически активных веществ как гормоны, витамины, простагландины. Липиды, наряду с белками, играют важную роль в структурной организации клеточных мембран, поэтому с ними связаны многие эффекты лекарственной терапии.

Лабораторная работа №17

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы

источник

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке; с депротеинизацией.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: энзиматический, гексокиназный UV-метод; по конечной точке.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке; с депротеинизацией.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке; с депротеинизацией.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: энзиматический, гексокиназный UV-метод; по конечной точке.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

источник

Тема: Клинико-биохимическая лаборатория

Казань – 2016

Перечень приборов………………………………………………………….
Перечень оборудования……………………………………………………….
Список посуды………………………………………………………….
Список реактивов………………………………………………………….
Методика для определения глюкозы в крови………………………………..
Оборудование и мебель……………………………………………………….
Перечень приказов………………………………………………………….
Площадь лаборатории…………………………………………………………
Энергообеспечение……………………………………………………………
Водообеспечение………………………………………………………….
Поверка приборов………………………………………………………….
График средств измерений………………………………………………………….
Список журналов………………………………………………………….
Аттестация сотрудников………………………………………………………
Сотрудники лаборатории……………………………………………………
Должностные инструкции…………………………………………………….
Аккредитация лаборатории………………………………………………….
Пробоотбор. Хранение проб………………………………………………….
Утилизация отходов………………………………………………………….
Инструкция по охране труда при работе в клинико-диагностических лабораториях………………………………………………………………………….
Правила безопасности хранения химических реактивов
Акт результатов анализа………………………………………………………
Схема лаборатории………………………………………………………….
Схема размещения мебели, приборов и т.д.…………………………………
Схема пожарной безопасности……………………………………………….

Список исполнителей

Руководитель проекта:
Студент 01-540-3 гр. каф. БиБ ___________ подпись, дата М. Ж. Ле
Исполнители проекта:
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Х.Т. Чан
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Ж. Данияров
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Л. Зенкова
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Т.Л. Динь

Перечень анализов

Названия анализов Количество анализов/день Цены (руб.)
1 2 3
1. Гематологические исследования
1.1. Общий анализ крови CBC
1.2. Общий анализ крови CBC/Diff, с лейкоцитарной формулой (5 фракций лейкоцитов)
1.3. Лейкоцитарная формула (микроскопия)
1.4. Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ)
1.5. Ретикулоциты
1.6. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
2. Коагулологические исследования (гемостаз)
2.1. Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ)
2.2. Определение протромбиновое (тромбопластиного) времени в крови
2.3. Определение протромбина по Квику (ПТИ) в крови
2.4. МНО (международное нормализированном отношении)
2.5. Исследование уровня фибриногена в крови
2.6. Исследование Д-димера в крови
2.7. Определение тромбинового времени в крови
2.8. Исследование уровня протеина С в крови
2.9. Исследование уровня антитромбина IIIв крови
2.10. Исследование агрегации тромбоцитов (спонтанная)
2.11. Исследование агрегации тромбоцитов стимулированная АДФ
2.12. Исследование агрегации тромбоцитов стимулированная коллагеном
2.13. Исследование агрегации тромбоцитов стимулированная ристоцетином
3. Биохимические исследования крови
3.1. Альбумин
3.2. Общий белок
3.3. Белковые фракции (электрофорез)
3.4. Креатинин
3.5. Креатинин + мочевина + альбумин + СКФ (MDRD)
3.6. Мочевина
3.7. Мочевая кислота
Продолжение таблицы
1 2 3
3.8. Миоглобин
3.9. Тропонин I
3.10. Гомоцистеин
3.11. CRP
3.12. Альфа1- кислый гликопротеин
3.13. Антистрептолизин О
3.14. Ревматоидный фактор
3.15. Церулоплазмин
3.16. Катионный протеин эозинофилов
3.18. C3 – компонент комплемента
3.19. C4 – компонент комплемента
3.20. Иммуноглобулины A (IgA)
3.21. Иммуноглобулины M (IgM)
3.22. Иммуноглобулины G (IgG)
3.23. Иммуноглобулин E (IgE)
3.24. Глюкоза
3.25. Гликозилированный гемоглобин (HbA1c)
3.26. Фруктозамин
3.27. Глюкозотолерантный тест
3.28. Лактат (молочная кислота)
3.29. Холестерин
3.30. Холестерин-ЛПВП (липопротеинов высокой плотности)
3.31. Холестерин-ЛПНП (липопротеинов низкой плотности)
3.32. Триглицериды
3.33. Аполипопротеин A1
3.34. Аполипопротеин B
3.35.Липопротеин (а)
3.36. Липидограмма
3.37. Билирубин общий
3.38. Билирубин прямой
3.39. Билирубин и его фракции: общий, прямой (связанный), непрямой (свободный)
3.40. Альфа-амилаза панкреатическая
3.41. ГГТП (гамма-глутамилтранспептидаза)
3.42. ЛДГ (лактатдегидрогеназа)
3.43. Липаза
3.44. Креатинкиназа (CK)
3.45. Холинэстераза
Продолжение таблицы
1 2 3
3.46. Кислая фосфатаза
3.47. Простатическая кислая фосфатаза (PAP)
3.48. Щелочная фосфатаза
3.50.Калий/Натрий/Хлориды
3.51. Кальций общий
3.52. Кальций ионизированный
3.53. Фосфор неорганический
3.54. Магний
3.55. Цинк
3.56. Медь
3.58. Комплексный анализ сыворотки крови на наличие тяжелых металлов и микроэлементов
3.59. Железо
3.60. Латентная железосвязывающая способность сыворотки (ЛЖСС)
3.61. Общая железосвязывающая способность сыворотки
3.62. Трансферрин
3.63. Насыщение трансферрина железом (TS)
3.64. Ферритин
3.65. Витамин А (ретинол)
3.66. Витамин C (аскорбиновая кислота)
3.67. Витамин D (кальциферол)
3.68. Витамин E (токоферол)
3.69. Витимин К (филлохинон)
3.70. Витамин B1 (тиамин)
3.71. Витамин B2 (рибофлавин)
3.72. Витамин B3 (ниацин)
3.73. Витамин B5 (пантотенова кислота)
3.74. Витамин B6 (пиридоксин)
3.75. Витамин B12 (цианкобаламин)
3.76. Антитела к внутреннему фактору
3.77. Фолиевая кислота
4. Биохимические исследования мочи
4.1. Глюкоза мочи
4.2. Белок мочи
4.3. Альфа-амилаза в моче
4.4. Альфа-амилаза панкреатическая в моче
4.5. Альбумин в моче (микроальбуминурия)
Окончание таблицы
1 2 3
4.6. Бета-2-микроглобулин в моче
4.7. Комплексный анализ мочи на наличие тяжелых металлов и микроэлементов
4.8. Свинец (Pb) в моче
4.11. Креатинин в моче
4.12. Мочевина в моче
4.13. Мочевая кислота в моче
4.14. Калий/Натрий/Хлориды в моче
4.15. Кальций в моче
4.16. Фосфор в моче
4.17. Магний в моче
4.18. Медь в моче
4.19. Кортизол в моче
4.20. Кортизол свободный в моче
4.21. Комплексный анализ метаболитов адреналина, норадреналина, дофамина, серотина (ГВК, ВМК, 5-ОИУК) (моча)
4.22. Анализ мочи на содержание промежуточных метаболитов катехоламинов: метанефрин, норметанефрин
4.24. Стероидный профиль мочи
Читайте также:  Что влияет на уровень сахара в крови водка

Перечень приборов

Оборудование Марка оборудования
Прибор для определения времени коагуляции Thrombolyser Sysmex X-300
Двухканальный лазерный анализатор Thrombotimer 4
Центрифуга многофункциональная 5702R
Дистиллятор GFL-2012
Персональный вортекс V-1 plus
Весы аналитические Sartorius Cubis
Автоматическая станция по преаналитическому отбору и подготовке образцов крови FE 500 pro
Автоматический биохимический анализатор с ионселективным блоком AU-680, Beckman Coulter (США).
Автоматическая электрофоретическая система SAS-1 Plus/ SAS-2, Helena Bioscience Europe (Великобритания)
Автоматизированная система для иммуногематологических исследований с помощью гелевых ID-карт Swing&Saxo, DiaMed (Швейцария).
Автоматический анализатор мочи H-800, Dirui (KHP).
Автоматический гематологический комплекс XEAlphaN, SysmexCor. (Япония).
Анализатор электролитов EASYLYTE PLUS Na/K/Cl, Medica Corp. (США).

Список посуды

Наконечники без фильтра до 1000мкл;

Наконечники без фильтра до 200мкл;

Наконечники без фильтра до 10 мкл;

Наконечники без фильтра до 5мл;

Штатив «раболее место» для микропробирок на 1,5 мл, 5х10 мест;

Штатив-карусель для пипеток Eppendorf;

Подставки для наконечников до 1000мкл; до 200 мкл; до 10мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 2-20 мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 20-200 мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 100-1 000 мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 500-5000 мкл;

Пробирки Vacuette с натрия цитратом 3,2% с двойной стенкой;

Контейнер круглый для транспортировки 12 пробирок D (9-16) мм (Greiner);

Игла-бабочка Vacuette 23Gх3/4″ с луэр-адаптером и держателем;

Микропробирки для гемостаза;

Цилиндр с пробкой до 100 мл;

Колба Эрленмейера (коническая);

BFA/BCT Система для размещения образцов 6х10 роторов по 32 кюветы (с мешалками);

Чашка для сбрасывания наконечников (4 шт);

Список реактивов

№ п/п Наименование реактивов Ед. Количество
день 1/10 1/100 г/год
Набор реактивов для определения АЛТ в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения АСТ в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения мочевины в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения креатинина в сыворотке крови в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор для определения концентрации калия в сыворотке крови турбидиметрическим методом без депротоинизации с татрафенилборатом-100мл шт.
Линейность до 10 ммоль/л Отклонение от линейности не более 7% Время инкубации 5 минут Чувствительность 1 ммоль/л
Набор реагентов для определения концентрации мочевой кислоты ферментативным методом по конечной точке- 100мл Линейность до 1200 мкмоль/л Чувствительность 35 мкмоль/л Коээф. вариации не более 5% шт.
Набор для определения концентрации глюкозы в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом– 1000мл Линейность до 20 ммоль/л Чувствительность 0,5 ммоль/л шт.
Продолжение таблицы
Набор для определения активности α- амилазы кинетическим методом в сыворотке крови и моче- 200 опред. Линейность до 1100 ммоль/л Чувствительность 16 Е/л Коэф. вариации не более 5% шт.
Набор реактивов для определения протромбинового времени на коагулометре Start 4 (Roche) 6 х15 мл шт.
Набор реактивов для определения АПТВ (АЧТВ) на коагулометре Start (Roche) 6 х5 мл в цитратной плазме. Реагент из мозговых фосфолипидов в забуференной суспензии каолина. Тест мало чувствителен к волчаночных антикоагулянтов. шт.
Шарики для коагулометра Start 4 уп.
Кюветы (стрипы по 4 шт.) одноразовые для коагулометра Start 4 шт.
Скарификаторы одноразовые стерильные уп.
Стекло предметное 25×75×1 шт.
Термобумага для анализатора Clina МС-15 110×50×12 уп.
Стекло покровное 18 х 18 уп.
Тест полоски для определения глюкозы в крови для портативного глюкометра «Сателлит» уп.
Планшет 96- луночный круглодонный (U-образный) шт.
Кислота уксусная ледяная х/ч кг
Набор реактивов для определения уровня общего белка в сыворотке крови в сыворотке крови на биологическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Капиляры Панченкова (СОЭ) шт.
Раствор красителя по Романовскому л
Набор реагентов для определения содержания гемоглобина в кров шт.
Продолжение таблицы
Раствор бриллиантового крезилового синего для окраски ретикулоцитов 50 мл шт.
Тест полоски для определения белка в моче полуколичественным методом уп.
Наконечники для автоматических дозаторов 300мкл уп.
Наконечники для автоматических дозаторов 1000мкл уп.
Аппарат (штатив) СОЭ-метр (Панченкова) без капилляров шт.
Набор для определения глюкозы в крови по конечной точке колориметрическим энзиматическим методом 100 опред. шт.
Набор реагентов для определения протромбинового времени со стандартизированным растворимым кроличьим тромбопластином с кальцием на 100 определений Линейность в диапазоне от 12 до 110 сек Коэф. вариации не превышает 6% Допустимый разброс результатов определения протромбинового времени в одной пробе плазмы крови разными наборами одной серии не превышает 10% Международный индекс чувствительности тромбопластина-1,25 шт.
Набор реагентов для определения протромбинового времени со стандартизированным растворимым кроличьим тромбопластином с кальцием на 40 определений Линейность в диапазоне от 12 до 110 сек Коэф. вариации не превышает 6% Допустимый разброс результатов определения протромбинового времени в одной пробе плазмы крови разными наборами одной серии не превышает 10% Международный индекс чувствительности тромбопластина-1,25 шт.
Продолжение таблицы
Набор реагентов для определения активированного парциального (частичного) тромбопластинового времени (АПТВ/ АЧТВ) АВР и ЧТВ на 100 определений Линейность определения в диапазоне от 30 до 300 сек. Коэф. вариации результатов определения АПТВ не превышает 6%; Допустимый разброс результатов определения АПТВ в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10% Тест чувствительности к присутствию в крови антикоагулянтов шт.
Набор реагентов для определения гемоглобина в крови гемихромным методом с калибратором для фотометра «Микролаб 540» Чувствительность 25 г/л Коэф. вариации не больше 2% Результаты контроля соответствуют 1,5%, аттестованное значение концентрации гемоглобина в калибраторе 139,8 г/л шт.
Камера Гаряева (двухсеточная) шт.
Цоликлон анти А фл.
Цоликлон анти В фл.
Цоликлон анти Д-супер фл.
Антиген кардиолипиновый для реакции микропреципитации уп.
Набор контрольных растворов гемоглобина 3-х концентраций (низкий, средний, высокий) с известным значением шт.
Набор для определения мочевины в сыворотке крови кинетическим методом 100 определений шт.
Набор красителей для окраски мазков по Граму (с сафронином) шт.
Продолжение таблицы
Набор реактивов для определения общего билирубина в сыворотке крови на биологическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения прямого билирубина в сыворотке крови на биологическом анализаторе Кобас С 111 на 100 тестов шт.
Депротеинизатор для биохимического анализатора Кобас С 111 шт.
Кюветы измерительные для биохимического анализатора Кобас С 111 уп.
Вода деионизированная 5л в бутылке бут.
Натрий лимоннокислый 3-х зам., ч. кг
Стекло покровное 24 х 24 ( уп. 100шт.) уп.
Набор реактивов для определения активности АЛТ в сыворотке крови кинетическим методом 100 определений уп.
Набор реактивов для определения активности АСТ в сыворотке крови кинетическим методом 100 определений уп.
Набор реактивов для определения билирубина (общий+прямой) 600мл шт.
Набор реактивов для определения С-реактивного белка в реакции агглютинации латекса-250 определений шт.
Креатинкиназа МВ фракция метод с иммунным ингибированием с последующим ферментативным определением креатинкиназы 60мл, кинетика, Линейность до 2000 Е/л шт.
Набор для определения активности лактатдегидрогеназы 125мл кинетическим методом. Линейность до 2300 Е/л. Отклонение от линейности – не более 5%. шт.
Набор для определения уровня общего белка в сыворотке крови биуретовым методом 1000мл. шт.
Продолжение таблицы
Контрольная сыворотка лиофилизированная универсальная на основе человеческой сыворотки с известными значениями в области нормы- 30мл. шт.
Контрольная сыворотка лиофилизированная универсальная на основе человеческой сыворотки с известными значениями в области патологии 30мл. шт.
Термобумага 57х20 без сетки шт.
Набор для определения щелочной фосфотазы оптимизированный стандартный кинетическим методом 200 определений шт.
Набор для определения глютамилтранспептидазы (ГГТП) кинетическим методом. Коэфф.вариации не менее 5%. Линейность 200 Е/л. Чувствительность 5% уп.
Тест-полоски для анализатора мочи ClinitecStatus Чувствительность: белок-0,15-0,3 г/л протеина; кровь-150-620 мкг/л гемоглобина; лейкоциты-5-15 телец/мкл в клиническом образце; нитриты 13-22 мкм/л нитрит иона; глюкоза 4-7 ммоль/л глюкозы; кетон 0,5-1,0 ммоль/л ацетоукс.кислоты; билирубин-7-14мкмоль/л биллирубина уп.
Тест-полоски для анализатора мочи «Лаура» Smart Нитриты-0,8г/л; белок-0,22 г/л; глюкоза-1,7ммоль/л; кетоны 0,3 ммоль/л; уробилиноген 13,5 мкмоль/л; билирубин-13,7 мкмоль/л; Le-20в мкл.; кровь 5эр.в мкл. уп.
Шпатель для языка одноразовый стерильный деревянный уп.
Продолжение таблицы
Тропанин Т (10 тестов) уп.
Набор реактивов для определения сывороточного альбумина в сыворотке крови с бромкрезоловым порпурным в ацетатно-фосфатном буфере 200мл Кофф. Вариации не менее 4% шт.
Кюветы для анализатора Clima МС-15 уп.
Набор реактивов для определения сывороточного железа на 100 опр. шт.
Камера Фукса-Розенталя шт.
Желатин 10% для опр.резус-фактора уп.
Респираторы «3М» 9322 с клапаном шт.
Набор иммунохроматографических тестов для качественного определения малярийного антигена на 25 опр. шт.
Укладка контейнер лабораторный со штативом УКП-50-1 шт.
Раствор красителя пиррогалового красного для определения белка в моче фотометрическим методом- 500мл. шт.
Стекло покровное к камере Горяева шт.
Пипетка Сали прецизионная, 20 мкл шт.
Карандаш-маркер по стеклу шт.
Карандаш по стеклу (красный) уп.
Пипетка автоматическая переменного объема (дозатор) 100-1000мкл шт.
Пипетка автоматическая переменного объема (дозатор) 5-50мкл шт.
Холестерин ЛПВП (осадитель) осаждающий реагент и стандарт для использования совместно с набором для определения общего холестерина уп.
Набор реактивов для определения общего холестерина сыворотки крови ферметативным методом с липидпросветляющим фактором (АЛФ) линейность до 19,3 ммоль/л; 3 х 250 монореагент уп.
Окончание таблицы
Набор реактивов для определения триглицеридов в сыворотке крови ферметативный колометрический тест 3 х250 мл монореагент линейность до 11,4 ммоль/л уп.
Набор регентов для обнаружения, яиц гельминтов методом толстого мазка (метод Като) уп.
Набор реагентов для определения скрытой крови в кале уп.

Методика для определения глюкозы в крови

Нормальное содержание глюкозы в крови показано в таблице:

Возраст Нормальное содерхжание, ммоль/л
в плазме, натще в сыворотке крови, натще
Новорожденные 1,7 — 4,2 2,6 — 4,2
Дети от 6 недель до 2 лет 3,3 — 5,4
Дети от 6 недель до 15 лет 3,3 -5,4
Взрослые (мужчины, женщины) 3,9 — 5,6 3,9 — 5,6

Необходимые реактивы для определения глюкозы глюкозооксидазным методом

1. Натрия хлорида 9 грамм/литр (изотонический раствор): готовят, раст­воряя 0,9 г NaCl в 100 мл воды.

2. Цинка сульфат, 50 г/л: 5 г сульфата цинка (ZnSO4) растворя­ют в воде, объем доводят до 100 мл.

Читайте также:  Норма сахара в крови при ттг

3. Натр едкий, 0,3 моль/л: готовят, растворяя 1,2 г NaOH в 100 мл воды, концентрацию проверяют титрованием (она должна быть 0,3 н).

4. Ортотолуидин, 1%-ный раствор: 1 г препарата растворяют в 100 мл абсолютного спирта. Раствор можно хранить в холодиль­нике в склянке с притертой пробкой несколько месяцев. Имею­щийся в продаже препарат можно очистить перекристаллизацией, для чего его растворяют в абсолютном спирте, добавляют воду и выпавшие кристаллы отсасывают на фильтре, затем сушат над хлоридом кальция.

5. Ацетатный буферный раствор рН 4,8: смешивают 4 части 0,25 н уксусной кислоты (проверить титрованием) и 6 частей 0,25 н ацетата натрия (содержит 34 г CH3COONaX ЗН2О в 1 литре).

6. Глюкозооксидаза — сухой препарат активностью 3000 ед/мг или больше.

7. Пероксидаза из хрена. 1 мг растворяют в 5 мл ацетатного буфера, в холодильнике можно хранить не­сколько дней.

8. Рабочий реактив: в 80 мл ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолуидина, перемешивают и доводят объем буферным раствором до 100 мл. Рабочий реактив должен быть прозрачным, бесцветным или иметь слабо-зеленый оттенок, в этом случае он устойчив при хранении на холоде. Если же окраска интенсивна или через несколько часов после приготовления начи­нает выпадать осадок, это значит, что ортотолуидин недостаточ­но чистый и его надо перекристаллизовать.

9. Калибровочные растворы глюкозы. Глюкозу предваритель­но высушивают при температуре 37°С и хранят в эксикаторе. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мг вещества растворяют в 20 мл насыщенного раство­ра (примерно 0,3%-ного) бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 3; 6; 9; 12; 15; 18 и 21 ммоль/л, для чего берут 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3; 3,6 и 4,2 мл основного раствора и доводят насыщенным раствором бензойной кислоты до объема 10 мл. Эти растворы содержат глюкозу в тех же концентрациях, в которых она бывает в крови, что облегчает расчеты при калибровке.

Ход определения глюкозы глюкозооксидазным методом

В центрифужные пробирки вносят 1,1 мл раствора хлорида натрия, 0,4 мл раствора сульфата цинка и 0,4 мл 0,3 н раствора NaOH, перемешивают; при этом образуется очень тонкий гель гид­рата окиси цинка, в него выпускают 0,1 мл крови или калибровоч­ного раствора, снова перемешивают и через 10 минут центрифуги­руют при скорости 3000 об./мин в течение 10 минут.

К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл рабочего реак­тива и осторожно перемешивают.

Постепенно начинает развиваться окраска, которая при обычной комнатной температуре достигает максимума через 13-15 минут, а затем постепенно умень­шается. Фотометрируют всегда через один и тот же промежуток времени после добавления рабочего реактива в кюветах с длиной оптического пути 1 сантиметр с красным светофильтром (длина волны 625 нм) против холостого опыта, который ставят одновременно с рабочими пробами, но вместо крови берут физиологический раствор хлорида натрия.

При приготовлении калибровочного гра­фика вместо проб крови берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора.

Расчет уровня глюкозы можно проводить по правилу пропорций или по калиб­ровочному графику, для построения которого на одной оси откла­дывают концентрацию глюкозы (ммоль/л), а на другой — величи­ну экстинкции.

Примечания к методика определения глюкозы глюкозооксидазным методом

1. Можно сначала выпустить кровь из пипетки в изотониче­ский раствор хлорида натрия, а затем добавить растворы сульфа­та цинка и NaOH.

2. При систематической работе нет необходимости постоянно строить калибровочный график по всем точкам, достаточно еже­дневно обрабатывать холостую пробу и 2-3 точки в диапазоне 3-9 ммоль/л, а полный калибровочный график строить лишь при смене реактивов или налаживании методики.

источник

Более 90% всех растворимых низкомолекулярных углеводов крови приходится на глюкозу, кроме того, в небольших количествах могут присутствовать фруктоза и пентозы, а при патологии и галактоза.

Глюкоза распределена почти равномерно между плазмой и эритроцитами, поэтому может определяться в цельной крови, плазме и сыворотке крови. Нормальное содержание в крови составляет 3,3-5,5 мМ/л. В физиологических условиях в крови может повышаться после обильной углеводной пищи, физиологических нагрузок, сильных эмоций.

Гипергликемия наблюдается при многих патологических состояниях: сахарном диабете, панкреатите, травмах и сотрясениях головного мозга, энцефалите, муковисциидозе, психическом возбуждении, отравлениях окисью углерода, ртутью. В зависимости от тяжести сахарного диабета уровень глюкозы натощак составляет : при легкой степени – 6,7-7,8 мМ/л.

Гипогликемия бывает при передозировке инсулина, заболеваниях поджелудочной железы, злокачественных заболеваниях, некоторых инфекционных и токсических поражениях печени, гипотириозе, наследственных заболеваниях, связанных с дефицитом ферментов.

Глюкозурия отмечается при сахарном диабете, гиперплазии коры надпочечников, нарушениях функции почек, сепсисе, травмах и опухолях головного мозга,отравлениях морфином, панкреатите, синдроме Фанкони.

Однократная нагрузка глюкозой вызывает у больных сахарным диабетом медленное нарастание гликемической кривой, при этом гипогликемическая фаза обычно не выявляется, понижение кривой очень медленное. В моче также определяется сахар.

В соременной диагностике сахарного диабета критерием является повышение содержания глюкозы в крови натощак до 7, 0 мМ/л, проводят пробу на выявление нарушения толерантности к глюкозе. Пробу проводят с сахарной нагрузкой, исследуют содержание глюкозы в крови натощак после приема внутрь 75 г глюкозы, растворенной в 200-300 мл воды. Кровь из пальца для определения содержания глюкозы берут каждые 30 минут в течение 2 часов. Проводится также тест на определение гликозилированного гемоглобина. В крови глюкоза связывается с молекулой гемоглобина (НвАIс) внутри эритроцитов. Число, связанных частиц глюкозы с молекулой гемоглобина напрямую связано с концентрацией глюкозы в крови, так как эритроциты живут 90 дней. По анализу гликозилированного гемоглобина можно установить концентрацию глюкозы за 3 месяца. Повышение уровня с определенного уровня на 5% говорит о хорошо скомпенсированном сахарном диабете, на 10% — частично компенсированный диабет, на 12% и более – некомпенсированный сахарный диабет.

Важно также для диагностики сахарного диабета определение концентрации инсулина и С-пептида. В молекуле преинсулина есть С-пептид, состоящий из 31 аминокислоты, соединяющий А и В цепи. При синтезе инсулина он вырезается пептидазами и вместе с инсулином он попадает в кровоток. До отщепления пептида инсулин не активен. Это позволяет поджелудочной железе образовывать запасы инсулина. С-пептид и инсулин выделяется в равных количествах, поэтому по С-пептиду можно оценить секрецию инсулина. Но надо знать, что скорость выведения из кровотока этих веществ разная. С-пептид дольше находится в крови, чем инсулин и он стабильнее инсулина в 5 раз. У здоровых С-пептид находится в пределах 1-4 нг/мл, инсулин от 6 до 27 мЕ/ мл. Повышение уровня С-пептида может свидетельствовать о гипертрофии В-клеток, об инсулин независимом сахарном диабете (ИНСД). Понижение С-пептида отмечается при инсулинзависимом сахарном диабете (ИЗСД).

В диагностике сахарного диабета применят определение концентрации альбумина в моче. В суточной моче у здоровых людей может обнаруживаться до 8 мг белка. При сахарном диабете белок повышается до 20-300 мг/л.

Дополнительным критерием на риск возникновения сахарного диабета является определение липидного обмена. Уровень триглицеридов в крови изменяется параллельно повышению содержания сахара в крови.

Методы определения глюкозы разделяют на три группы:

· методы с использованием цветных реакций, в которых участвуют продукты, образующиеся при нагревании углеводов с концентрированными кислотами.

Ферментативные методы исследования сочетают в себе высокую точность, они основываются на одной из двух реакций – гексокиназной или глюкоооксидазной. При гексокиназной глюкоза сначала фосфорилируется за счет АТФ благодаря действию гексокиназы; образовавшийся глюкозо-6-фосфатный эфир в присутствии глюкозо- 6- фосфат-дегидрогеназы восстанавливает NADP, количество которого определяется по увеличению светопоглощения в ультрафиолетовой области.

Легче выполнимы глюкозооксидазные методы, в которых глюкозоксидаза окисляет глюкозу кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, количество которой определяется или химическим путем, или по ее способности в присутствии пероксидазы окислять диамины с образованием окрашенных продуктов.

Принцип метода: Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет ортотолидин с образованием синего хромогена.

1.Натрия хлорид 9 г/л (0,9г NaСI в 100 мл воды).

2. Сульфат цинка, 50 г/л: 5г сульфата цинка растворяют в воде, объем доводят до 100 мл.

3. Натр едкий, 0,3 моль/л: готовят, растворяя 1,2 NaOH в 100 мл воды.

4. Ортотолиидин, 1% раствор: 1г препарата растворяют в 100 мл абсолютного спирта.

5. Ацетатный буферный раствор рН 4,8: смешивают 4 части 0,25 Н уксусной кислоты и 6 частей 0,25 Н ацетата натрия.

8. Рабочий реактив в 80 мл ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолидина, перемешивают и доводят объем буферным раствором до 100 мл.

9. Калибровочные растворы глюкозы. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мг глюкозы растворяют в 20 мл бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие: 3 ммоль/л; 6 ммоль/л; 9 ммоль/л; 12 ммоль/л; 15 ммоль/л; 18 ммоль/л; 21 ммоль/л, для чего берут 0,6 мл; 1,2 мл; 1,8 мл; 2,4 мл; 3,6 мл; 4,2 мл основного раствора и доводят насыщенным раствором бензойной кислоты до 10 мл. Эти растворы содержат глюкозу в тех же концентрациях, в которых она бывает в крови.

Ход определения: В центрифужные пробирки вносят 1,1 мл хлорида натрия, 0,4 мл раствора сульфата цинка и 0,4 мл 0,3 Н раствора NaOH, перемешивают; при этом образуется очень тонкий гель гидрата окиси цинка, в него выпускают 0,1 мл крови или калибровочного раствора, снава перемешивают и через 10 мин. центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл рабочего реактива и осторожно перемешивают. Через 15 минут развивается окраска и фотометрируют в кюветах с длиной оптического пути 1 см с красным светофильтром (625 нм) против холостого опыта, который ставят одновременно с рабочими пробами, но вместо крови берут физиологический раствор хлорида натрия. При приготовлении калибровочного графика вместо проб крови берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора.

Нормальные величины натощак: 3,5- 5,7 ммоль/л (60-100 мг в 100 мл).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Методы объемного анализа, приготовление титрованных растворов, индикаторов, подготовка посуды изложены в предшествующих курсах техники лабораторных работ, аналитической химии, общей биохимии и пр. В данном руководстве приведены лишь биохимические методы исследования, предусмотренные программой.

В лабораториях пользуются для колориметрирования спектрофотометром или фотоэлоктроколориметром. Если этих приборов нет, то используют колориметр Дюбоска или Аутенрита.

Для проведение данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Штативы.
  2. Капельницы.
  3. Градуированные пипетки на 1, 2, ,5 и 10 мл.
  4. Пипетка Мора на 2 мл.
  5. Химические пробирки.
  6. «Сахарные» пробирки (высота 16 см, диаметр 2-2,5 см).
  7. «Сахарные» воронки.
  8. Колбочки на 50 мл.
  9. Колбочки на 100 мл.
  10. Прокипяченная и высушенная вата.
  11. Водяная баня.
  12. Песочные часы на 15 минут.
  13. Микропипетки на 0,1 мл.
  14. Набор для взятия крови.
  15. Сернокислый цинк (ZnS04).
  16. Едкий натр (NaOH).
  17. Красная кровяная соль (железосинеродистый калий) — K3[Fe(CN)6].
  18. Хлористый натрий (NaCl).
  19. Йодистый калий (KJ).
  20. Ледяная уксусная кислота.
  21. Гипосульфит натрия (Na2S203 • 5Н20).
  22. Растворимый крахмал.
  23. Йодноватистокислый калий (KJO3).
Читайте также:  Сиофор и дибикор что лучше

Принцип метода основан на способности глюкозы вступать в окислительно-восстановительные реакции. Глюкоза, окисляясь, восстанавливает в щелочной среде железо красной кровяной крови, превращая ее в желтую. Невосстановленную красную кровяную соль определяют йодометрически: по количеству восстановленной красной кровяной соли определяют количество глюкозы в крови.

Для этого метода используют следующие реактивы:

  1. 45% раствор сернокислого цинка: 45 г химически чистого сернокислого цинка помещают в колбочку на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл. Реактив стоек.
  2. 0,45% раствор сернокислого цинка. Реактив готовят из 45% раствора сернокислого цинка: 1 мл 45% раствора сернокислого цинка помещают в колбочку емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл; реактив готовят каждую неделю.
  3. 0,1 N раствор NaOH. Поскольку в едком натре содержатся углекислые соли и вода, приготовить точный раствор его при растворении навески вещества невозможно. Поэтому вначале готовят насыщенный водный раствор химически чистой едкой щелочи.

Насыщенный раствор едкого натра ввиду сильного его разогревания приготовляют в толстостенной посуде. Хранить реактив рекомендуется в бутылке, внутренние стенки которой покрыты парафином, иначе стекло посуды постепенно выщелачивается. Приготовленный насыщенный раствор NaOH отстаивается в течение 2-3 дней. Затем в мерную колбочку на 250 мл наливают 1,75 мл насыщенного раствора NaOH и доливают до метки свежепрокипяченной и остуженной дистиллированной водой.

Титр приготовленного раствора едкого натра устанавливают путем титрования его точным раствором 0,1 N щавелевой кислоты следующим образом. В три колбочки отмеривают по 20 мл 0,1 N раствора щавелевой кислоты и прибавляют по 1-2 капли 1% спиртового раствора фенолфталеина.

В бюретку наливают приготовленный раствор едкого натра и титруют им 0,1 N раствор щавелевой кислоты в каждой колбочке до появления красного окрашивания. Учитывают количество едкого натра, пошедшего на титрование содержимого каждой колбочки, выводят средне-арифметическое и рассчитывают коэффициент поправки.

Затем количество миллилитров приготовленной щелочи умножают на коэффициент поправки и доливают дистиллированной водой до объема, полученного в результате расчета.

Пример расчета : объем исходного раствора щелочи 450 мл, коэффициент поправки 1,024: 450X1,024=460,8 мл.
Доводим исходный объем щелочи дистиллированной водой до 460,8 мл. Титр разведенного таким образом раствора еще раз проверяют титрованием точного раствора 0,1 N щавелевой кислоты.

4. 0,005 N раствор красной кровяной соли. Реактив готовят из перекристаллизованной красной кровяной соли. Перекристаллизацию проводят следующим образом. Кристаллы красной кровяной соли помещают в фарфоровую чашку, промывают несколькими порциями холодной воды и растворяют в небольшом количестве кипящей дистиллированной воды. Раствор фильтруют в горячем виде через предварительно промытый горячей дистиллированной водой фильтр в фарфоровую чашку (чашку помещают на лед или холодную воду). Образовавшиеся кристаллы сушат в сушильном шкафу или термостате при температуре 50°. Высушенные кристаллы хранят в тщательно закрытой банке в темном месте. Процесс перекристаллизации проводят при искусственном освещении.

Для приготовления реактива на аналитических весах взвешивают 1,65 г перекристаллизованной красной кровяной соли и навеску количественно переносят в мерную колбу емкостью 1 л. На технических весах взвешивают 10,6 г безводной соды. Для обезвоживания перед взвешиванием соду прокаливают и охлаждают в эксикаторе. Навеску безводной соды помещают в ту же мерную колбу. Вначале ее растворяют в небольшом количестве воды, а затем приливают дистиллированную воду до метки. Приготовленный раствор хранят в посуде из темного стекла в прохладном месте.

5. Тройной реактив (хлор-цинк-йодистый реактив): 50 г химически чистого сернокислого цинка и 250 г хлористого натрия растворяют в 1 л воды и фильтруют; реактив стоек. Перед употреблением реактива в нем растворяют 2,5 г йодистого калия.

6. 3% раствор уксусной кислоты: 3 мл ледяной уксусной кислоты помещают в колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки.

7. 0,005 N раствор гипосульфита натрия. Реактив готовят из 0,1 N раствора в момент постановки опыта. На технических весах взвешивают 25 г химически чистого гипосульфита натрия, растворяют в 1 л свежепрокипяченной и остывшей дистиллированной воды и оставляют на 8-14 дней в хорошо закупоренной посуде из темного стекла. Для приготовления 0,005 N раствора отмеривают 5 мл 0,1 N раствора гипосульфита в мерную колбу емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки.

8. 0,005 N раствор йодноватистокислого калия. Вначале готовят 0,1 N раствор йодноватистокислого калия, для чего на аналитических весах взвешивают 7,134 г KJO3, эту навеску растворяют в дистиллированной воде и доводят ее объем в мерной колбе на 1 л до метки. Раствор стоек.

Для прпготовлеппя 0,005 N раствора KJO3 5 мл 0,1 N раствора йодноватистокислого калия наливают в мерную колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки.

9. 1 % раствор крахмала: в колбочку на 100 мл наливают 50 мл насыщенного (35%) раствора поваренной соли и кипятят его. 1 г растворимого крахмала взбалтывают в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды и выливают при помешивании в кипящий насыщенный раствор поваренной соли; кипятят до просветления раствора, охлаждают и доводят до 100 мл насыщенным раствором хлористого натрия. Раствор сохраняет стойкость на неограниченный срок; с йодом дает синее окрашивание.

1. Для определения глюкозы в крови подготавливают четыре химические пробирки, нумеруют их и устанавливают в штатив. Первые две пробирки предназначаются для опытных проб, а две другие — для контролей.

2. Во все четыре пробирки наливают по 5 мл 0,45% раствора сернокислого цинка, по 1 мл 0,1 N раствора едкого натра и смешивают; получают хлопьевидную взвесь гидрата окиси цинка.

3. В первые две пробирки микропипеткой вносят по 0,1 мл крови, взятой у больного из пальца натощак. Затем кончик микропипетки тщательно вытирают, проверяют точность взятия крови и погружают микропипетку в жидкость. Кровь выдувают на дно пробирки, а микропипетку тщательно прополаскивают бесцветным раствором из верхнего слоя жидкости, после чего содержимое пробирок смешивают.

4. Все четыре пробирки ставят в кипящую водяную баню на 3 минуты. При кипячении в первых двух пробирках белки крови свертываются и образуют серовато-коричневый сгусток. В контрольных пробирках сгусток не образуется.

5. После трехминутного кипячения пробирки вынимают из водяной бани и охлаждают.

6. После охлаждения содержимое каждой пробирки встряхивают. При этом в первых двух пробирках разбиваются образовавшиеся сгустки.

7. В специальный штатив устанавливают четыре «сахарные» пробирки и нумеруют соответственно опытным и контрольным химическим пробиркам. В «сахарные» пробирки вставляют «сахарные» воронки с фильтром из прокипяченной и высушенной ваты. Ватный фильтр смачивают дистиллированной водой.

Содержимое каждой химической пробирки выливают на ватный фильтр соответствующей «сахарной» воронки. Пробирки дважды споласкивают каждый раз 3 мл дистиллированной воды и воду выливают в те же воронки. Капли воды, оставшиеся в узкой части воронки, стряхивают в пробирку или отжимают, надавливая ладонью на воронку. Получают прозрачный бесцветный фильтрат.

8. Во все «сахарные» пробирки приливают точно по 2 мл 0,005 N раствора красной кровяной соли.

9. Пробирки ставят в кипящую водяную баню на 15 минут.

10. За это время готовят хлор-цинк-йодистый реактив (тройной) и определяют титр 0,005 N раствора гипосульфита натрия по 0,005 N раствору KJO3. С этой целью в колбочку наливают точно 2 мл 0,005 N раствора йодноватистокислого калия, 3 мл тройного реактива, 2 мл уксусной кислоты, 2-3 капли 1% раствора крахмала и титруют 0,005 N раствором гипосульфита натрия из микробюретки до обесцвечивания раствора. Отмечают цифру ушедшего на титрование гипосульфита.

Пример расчета . На титрование 2 мл 0,005 N раствора йодноватистокислого калия ушло 1,94 мл гипольсуфита. Поправочный коэффициент гипосульфита: 2: 1,94 = 1,03.

Поправочный коэффициент учитывают при вычислении результатов определения, т. е. результат каждого определения умножают на 1,03. Поправочный коэффициент гипосульфита натрия можно определить по точно приготовленному 0,005 N раствору K3[Fe(CN)6]. Данные проверки по обоим исходным веществам — KJO3 и K3[Fe(CN)6l — должны быть одинаковыми. Поправочный коэффициент гипосульфита натрия определяют каждый раз перед титрованием проб.

11. По истечении 15 минут с водяной бани снимают «сахарные» пробирки и охлаждают их.

12. Во все пробирки приливают по 3 мл тройного реактива и по 2 мл 3% уксусной кислоты.

13. Непосредственно перед титрованием в каждую пробирку наливают по 2-3 капли 1% раствора крахмала. Так как в растворе содержится свободный йод, то с крахмалом он дает синее окрашивание.

14. Каждую из полученных проб титруют 0,005 N раствором гипосульфита натрия. Начинают титрование с контролей, а затем переходят к титрованию опытных проб. Титрование проводят следующим образом. К каждой пробе приливают по каплям из бюретки 0,005 N раствор гипосульфита натрия до момента полного обесцвечивания. Отмечают количество гипосульфита натрия, пошедшего на титрование. При правильно проведенном титровании разница между объемами гипосульфита натрия, пошедшего на титрование параллельных проб, не должна превышать 0,01 — 0,02 мл. Расчет содержания глюкозы в крови производят по табл. 10.

Пример расчета . Предположим, что на титрование содержимого контрольных пробирок (Ki и Кг) соответственно израсходовано 1,96 и 1,98 мл 0,005 N раствора гипосульфита натрия и на титрование опытных пробирок (Oi и 02) — 1,4 и 1,42 мл 0,005 N раствора гипосульфита натрия. Вычисляют среднее арифметическое из полученных данных.

Таким образом, на титрование содержимого каждой контрольной пробирки израсходовано 1,97 мл, а на титрование опытных пробирок — 1,41 мл 0,005 N раствора гипосульфита натрия.

Затем по таблице определяют количество глюкозы в миллиграмм-процентах следующим образом. В крайнем вертикальном столбце таблицы отыскивают целые и десятые миллилитра 0,005 N раствора гипосульфита натрия, ушедших на титрование, в верхнем горизонтальном столбце находят сотые. На пересечении соответствующих цифр таблицы находят цифру глюкозы, выраженную в миллиграммах на 100 мл крови (мг%). Таким образом, цифре 1,97 соответствует 5 мг%, а цифре 1,41 — 104 мг% глюкозы. Окончательную цифру получают путем вычитания результатов, полученных в контрольных пробах (так как реактивы обладают способностью восстанавливать красную кровяную соль), из результатов, полученных в опытных пробах 104—5 = 99 мг%.

Если в опытных пробирках после 15-минутного кипячения происходит обесцвечивание раствора, необходимо в пробирки добавить еще 2 мл 0,005 N раствора красной кровяной соли и снова прокипятить пробы в течение 15 минут. Пробирки охладить, прибавить все остальные реактивы и протитровать.

При расчете к найденной по таблице цифре глюкозы в миллиграмм-процентах прибавляют 385.

Пример расчета . После повторного прибавления 0,005 N раствора красной кровяной соли на титрование контролей израсходовано соответственно 1,96 и 1,98 мл 0,005 N раствора гипосульфита натрия, а на титрование опытных пробирок — 1,5 и 1,52 мл 0,005 N раствора гипосульфита натрия. Среднее арифметическое для контролей равно 1,97 мл, что соответствует 5 мг% глюкозы: среднее арифметическое для опытных проб равно 1,51, что соответствует 86 мг% глюкозы.

Ответ. Содержание глюкозы в крови равно: 385 + + 86-5 = 466 мг%.

Результаты определений оформляют в бланке анализа. В крови здоровых людей содержится от 70 до 120 мг% глюкозы.

источник