Реактивы для определения глюкозы в сыворотке крови

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке; с депротеинизацией.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: энзиматический, гексокиназный UV-метод; по конечной точке.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке; с депротеинизацией.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке; с депротеинизацией.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови.
Метод: энзиматический, гексокиназный UV-метод; по конечной точке.
Срок годности набора: 12 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

Набор реагентов для определения концентрации глюкозы.
Исследуемый материал: цельная кровь, сыворотка или плазма крови, моча.
Метод: реакция Триндера; GOD-PAP; с глюкозооксидазой по конечной точке.
Срок годности набора: 18 месяцев при +(2-8)ºС.

источник

Содержание глюкозы в крови – основной биохимический показатель состояния углеводного обмена. Нормальная концентрация глюкозы в крови – 3,5-5,5 (6,4)ммоль/л. Отклонение его от нормы происходит при ряде заболеваний.

Увеличение содержания глюкозы в крови (гипергликемия) наблюдается при сахарном диабете, остром панкреатите, панкреатических циррозах, эмоциональных стрессах, после эфирного наркоза, обильного приема углеводов с пищей, а также при повышении гормональной активности ряда желез (щитовидной, гипофиза, коркового и мозгового слоя надпочечников).

Снижение уровня глюкозы в крови (гипогликемия) встречается при поражении паренхимы печени, нарушении ферментативной активности при распаде гликогена; недостаточной функции щитовидной железы, надпочечников, гипофиза; передозировке инсулина при лечении сахарного диабета, нарушении всасывания углеводов, отравлениях фосфором, бензолом, хлороформом, при недостатке приема с пищей углеводов, после больших потерь крови.

Принцип метода. В основе метода лежит ферментативное окисление глюкозы кислородом воздуха при участии фермента глюкозооксидазы. При этой реакции образуется перекись водорода в количестве эквимолярном окисленной глюкозе. Перекись водорода в присутствии пероксидазы крови окисляет добавленный σ-толуидин, который приобретает синее окрашивание. Интенсивность возникшей окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы и определяется на фотоэлектроколориметре. Метод специфичен для глюкозы.

Исследуемый материал и реактивы

1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор. 5. Ферментно-хромогенная смесь (1таблетка). 6. Антикоагулянт (оксалат натрия, фторид натрия). 7. Калибратор (раствор глюкозы с концентрацией 10ммоль/л). 8. Дистиллированная вода.

А. Приготовление рабочих растворов. 1. Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц. 2. Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды.

Б. Приготовления калибровочной пробы. В пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа.

В. Определение содержания глюкозы в плазме крови. Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0,9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0,1 мл крови (или 0,45 мл и 0,05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа.

Для проведенения анализа на КФК в пробирки внести 2,0 мл рабочего раствора и добавить по 0,2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10мм, и по 0,4 мл – для кюветы с длиной оптического пути 5мм.

При использовании FP-901 в кюветы внести 0,7 мл рабочего раствора и 0,1 мл надосадочной жидкости.

Г. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови. При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

Для кювет с длиной оптического пути 10мм с длиной оптического пути 5мм
Реагенты Опытная проба, мл Калибр. проба, мл Холостая проба, мл Опытная проба, мл Калибр. проба, мл Холостая проба, мл
Рабочий раствор 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
Сыворотка крови 0,02 0,04
Калибратор 0,02 0,04
Вода дистил. 0,02 0,04

Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +37 0 С (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-25 0 С («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную.

После инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10мм при длине волны 500 (490-540)нм. Окраска проб сохраняет стабильность в течение более 4-х часов после окончания инкубации.

Концентрации глюкозы в пробах провести по формуле:

где С – концентрация глюкозы, моль/л; ЕО – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плот.; ЕСТ – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плот.; 10 – концентрация глюкозы в калибраторе, моль/л.

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученный результат и сделайте выводы.

Контрольные вопросы

  1. Какова нормальная концентрация глюкозы (сахара) в крови?
  2. Какие углеводы могут всасываться в тонком кишечнике человека?
  3. Что такое гипергликемия и гипогликемия? При каких состояниях организма наблюдаются гипер- и гипогликемия?

Биохимия липидов

Липиды – биологически важные органические соединения растительного и животного происхождения разнообразной химической структуры, нерастворимые в воде и растворимые в малополярных органических растворителях (эфир, спирт, хлороформ, ацетон и др.).

Липиды – важная составная часть пищевых продуктов не только вследствие высокой энергетической ценности, но также и потому, что в натуральных пищевых жирах содержатся жирорастворимые витамины и «незаменимые» жирные кислоты (полиненасыщенные), которые являются предшественниками таких биологически активных веществ как гормоны, витамины, простагландины. Липиды, наряду с белками, играют важную роль в структурной организации клеточных мембран, поэтому с ними связаны многие эффекты лекарственной терапии.

Лабораторная работа №17

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы

источник

Принципы: глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, при разрушении которой под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и р-аминоантипирина в окрашенное соединение. Интенсивность окрашивания при этом пропорциональна концентрации глюкозы.

.Реактивы, исследуемый материал1.Рабочий реактив. 2. Стандартный раствор глюкозы. 3. Исследуемая сыворотка.Концентрация глюкозы рассчитывается по формуле: Соn =(Еоn * Сст)/Ест (1-концентрация глюкозы в исследуемой пробе,2-оптическая плотность исследуемой пробы,3-концентрация глюкозы в стандартной пробе,4- оптическая плотность стандартной пробы)

Нормальная концентрация глюкозы крови- 3,65- 6,11 ммоль/л.

Повышение глюкозы в крови выше 6,11 ммоль/л называется гипергликемия. Различают две группы гипергликемии: 1. Инсулярные – связанные с недостаточным содержанием в организме инсулина или обусловленные неэффективностью его действия(сахарном диабете). 2.Экстраинсулярные – не зависящие от влияния инсулина: — повышенная гормональная функция щитовидной железы(гипертиреоз),надпочечников(феохромоцитома),гипофиза. – диффузные поражения печени. – механическое и токсическое поражение ЦНС. – травмы и опухоли мозга. – эпилепсия. – сильный эмоциональный стресс.

Наиболее существенное значение в формировании экстраинсулярных гипергликемий имеют следующие процессы: — усиленный распад гликогена. – повышенный глюкогенез. – торможение синтеза гликогена. – снижение утилизации глюкозы под влиянием гормонов – антагонистов инсулина.

Считается, что это состояние имеет место, когда уровень глюкозы в цельной крови менее 2,2 ммоль/л, а при определении ферментативным методом в сыворотке крови – менее 2,5 ммоль/л.

Симптомы гипогликемии могут быть обусловлены избыточной секркцией адреналина и дисфункцией ЦНС. Гипогликемия опасна тем, что глюкоза является жизненно важным энергетическим сырьем для головного мозга. Причины гипогликемии по механизму развития можно разделить на три группы:1.Сниженный выход глюкозы. 2. Увеличение утилизации глюкозы. 3. Сниженный выход и увеличение утилизации глюкозы.

Принцип метода: в основе количественного метода лежит биуретовая реакция: в щелочной среде ионы меди образуют с белками комплексные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации белка, которую измеряют фотометрически.

Реактивы, исследуемый материал:

Биуретовый реактив (рабочий реактив).

2. Стандартный раствор белка.

Концентрация общего белка рассчитывается по формуле: Соn =(Еоn * Сст)/Ест (1-концентрация общего белка в исследуемой пробе,2-оптическая плотность исследуемой пробы,3-концентрация общего белка в стандартной пробе,4- оптическая плотность стандартной пробы)

Нормальная концентрация общего белка крови у взрослых- 65-85г.л, у детей 56-85г.л

Диагностическое значение: Плазма крови человека содержит в норме более 100 видов белков. Около 90% общего белка составляют альбумин, иммуноглобулины, липопротеины, фибриноген, трансферин. Другие белки присутствуют в плазме в значительно меньших количествах.

Понижение концентрации общего белка в крови называется гипопротеинемией, соответственно повышение – гипопротеинемией.

Причинами гипопротеинемии являются:

1. алиментарный фактор ( т.е. недостаточное поступление белка с пищей): голодание, недоедание, связанные как со всевозможными диетами, так и такими заболеваниями, как стеноз пищевода, стеноз пилорического отдела желудка.

2.неусваивание белка вследствие различных заболеваний ЖКТ, например: хронические энтериты;

3.нарушение биосинтеза белка; гепатиты, циррозы, выраженные интоксикации, врождённые нарушения синтеза отдельных белков – анальбуминемия, болезнь Вильсона – Коновалова.

4.потеря белка с кровью (острые и хронические кровотечения) и мочой (нефротический синдром).

5.перемещение белка в другие ткани – это образование оттёков, переход в так называемое третье пространство (выпоты в серозные полости, в просвет кишечника, на ожоговую поверхность.

6. повышение распада белка в организме; опухоли, повышенная функция щитовидной железы, всегда имеет место при кишечной непроходимости.

7.физиологическое снижение концентрации белка, например в последние месяцы беременности и в период лактации.

Относительное снижение концентрации общего белка может наблюдаться при увеличении объема циркулирующей жидкости: большое введение жидкостей внутривенно-капельно, прекращении или резком уменьшении диуреза; гиперпродукции антидиуретического гормона гипоталамуса, сердечной декомпенсации.

Гиперпротеинемия встречается редко. Абсолютная гиперпротеинемия ( т.е. не связанная с нарушением водного баланса) наблюдается при миеломной болезни, хронических полиартритах, длительно протекающих воспалительных процессах. Относительная( т.е. вызванная снижением объема циркулирующей жидкости) – при тяжелых ожогах, перетоните, неукротимой рвоте и поносе, несахарном диабете, непроходимости кишечника, хронической почечной недостаточности, усиленном потооделении.

Следует помнить, что при некоторых заболеваниях, в часности кишечной непроходимости, разлитом перитоните возникающая относительная гиперпротеинемия, обнаруживаемая в биохимическом анализе крови, маскирует характерный для этой патологии дефицит белка.

Гипопротеинемия почти всегда связана с гипоальбуминемией, а гиперпротеинемия почти всегда с гиперглобулинемией.

источник

Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения содержания глюкозы сыворотке и плазме крови человека глюкозооксидазным методом «ГЛЮКОЗА — UTS»

по применению набора реагентов для количественного определения содержания глюкозы
в сыворотке и плазме крови человека глюкозооксидазным методом

Набор «ГЛЮКОЗА — UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.

Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05457

Информация для заказа набора «ГЛЮКОЗА — UTS»

реагент 100 мл + калибратор 1 мл

реагент 400 мл + калибратор 4 мл

где v – объем фотометрической ячейки анализатора.

1.1. Набор реагентов «ГЛЮКОЗА — UTS» предназначен для определения концентрации глюкозы в сыворотке и плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.

1.2. Глюкоза является одним из важнейших компонентов крови, ее количество отражает состояние углеводного обмена. Содержание глюкозы в крови повышается при сахарном диабете, эпидемическом энцефалите, повышении гормональной активности щитовидной железы и т. д. На этом основано клиническое значение анализа.

1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..

2.1. Глюкозооксидаза катализирует окисление β-D-глюкозы с образованием эквимолярных количеств глюконовой кислоты и перекиси водорода (1). Перекись водорода под действием пероксидазы в реакции с 4-аминоантипирин и фенолом образует окрашенный продукт – хинонимин (2), интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны нм [1,2].

β-D-Глюкоза + H2O + O2 Глюкозооксидаза Глюконовая кислота + Н2О2 (1)

2Н2О2 + 4-аминоантипирин + Фенол Пероксидаза Хинонимин + 4Н2О (2)

2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 505 нм молекулами хинонимина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации глюкозы в пробе.

3.1. Набор реагентов «ГЛЮКОЗА — UTS» поставляется в виде двух растворов: Реагента и калибратора.

источник

Принцип метода.Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием пероксида водорода, при разрушении которого под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и p-аминоантипирина в окрашенное соединение. Реакция протекает по схеме:

2О2 + фенол + 4-аминоантипирин -¾¾® 4(n-бензохинонмоно- + 4Н2О.

(п-аминофеназон) пероксидаза имино)-феназон

Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Ход работы:1. В пробирки внести реактивы в соответствии с указанными объемами:

Отмерить, мл Опытная проба Стандартная проба Контрольная проба
Сыворотка крови 0,02
Стандартный раствор глюкозы 0,02
Дистиллированная вода 0,02
Реактив для определения глюкозы 3,0 3,0 3,0

Пробы перемешивают и инкубируют 30 мин. в термостате при 37 0 С. Измеряют оптическую плотность опытной (Е1) и стандартной пробы (Е2) против контрольной в кювете 0,5 см, при длине волны 480-520 нм. Измерение должно быть проведено до истечения 5 минут.

Содержание глюкозы определяют путем расчета по формуле:

Сопоставить с нормой содержания у здоровых людей и сделать вывод.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студентов недели бывают четные, нечетные и зачетные. 9159 — | 7337 — или читать все.

85.95.189.26 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

источник

Глюкоза является основным углеводом крови человека; ее содержание в цельной крови натощак составляет З,3—5,5 ммоль/л; в сыворотке венозной крови натощак 3,4-6,1 ммоль/л. Другие углеводы фруктоза, манноза, галактоза, лактоза и пентозы — обнаруживаются в значительно меньших или следовых количествах. Под «сахаром крови» в узком смысле слова подразумевают только глюкозу. На уровень глюкозы крови оказывает влияние поступление углеводов с пищей; мобилизация гликогена печени; глюконеогенез; окисление глюкозы в тканях; синтез гетерополисахаридов, пентоз, аминокислот, синтез гликогена и жира и тканях. Глюкоза, являясь одним из важнейших компонентов крови, почти поровну распределяется между плазмой и форменными элементами с некоторым превышением ее концентрации в плазе. Поскольку глюкоза относится к альдогексозам, а альдегидная группа легко окисляется, то это широко используется при определении глюкозы. Для определения глюкозы крови предложено много методов, которые условно можно разделить на 3 группы:

1.Редуктометрические методы основаны на восстанавливающих свойствах глюкозы (метод Хагедорна-Иенсена; Фолина; Фолина-Ву и др.). Недостаток указанных методов заключается в том, что в сущности они определяют не только глюкозу, но и ряд других редуцирующих веществ (глутатион, АДФ, мочевая кислота, креатин, глюкуроновые кислоты, витамин С), присутствие которых может при вести к определению не «чистой глюкозы», а «кажущегося сахара» [Медицинские…, 1999]. Эта группа методов обладает низкой специфичностью и значительной трудоемкостью.

Колориметрические методы основаны на цветных реакциях глюкозы с некоторыми соединениями, например серной кислотой, пикринововой кислотой, антроном, ортотолуидином. Этими методами определяются все альдогексозы, но поскольку основным представителем альдогексоз является глюкоза, то получаемые результаты близки к содержанию истинной глюкозы в крови. Недостаток методов — высокая токсичность используемых реактивов.

3. Энзиматические методы являются наиболее специфичными и точными методами количественного определения глюкозы, в частности, глюкозооксидазный метод, с помощью которого определяют содержание «истинной глюкозы», равное З,4—5,6 ммоль/л [Trinder P., 1969; Долгов В.В. и др., 19…, Медицинские…, 1999]. Определение проводят натощак, чтобы избежать пищевой гипергликемии.

В ряде случаев требуется экспресс определение глюкозы крови. Для этих целей используют биохимические анализаторы — глюкометры, позволяющие провести определение глюкозы в течении 2-3 минут после забора крови. В основе работы анализаторов, как правило, лежит глюкозоксидазный метод.

Принцип метода: Глюкозоксидаза специфически катализирует перенос двух водородных атомов с первого углеродного атома глюкозы на кислород воздуха. При этом в ходе реакции образуется в эквимолярных количествах перекись водорода, которая разлагается вторым ферментом – пероксидазой, а выделяющийся в процессе реакции атомарный кислород окисляет добавленный в реакционную смесь производного фенола с 4-аминофеназином, который изменяет окраску. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы [Trinder P., 1969].

Ход определения: в три пробирки отмеривают по 1` мл глюкозового реактива. В первую пробирку прибавляют 0,1 мл стандартного раствора глюкозы (стандартная проба), во вторую 0,1 мл сыворотки крови (исследуемая проба) и в третью — 0,1 мл дистиллированной воды (контроль). Все пробы перемешивают и инкубируют в течении 15 минут при температуре 37 С. Затем измеряют оптическую плотность пробы и стандарта против контрольного раствора. Светофильтр синий 425-500 нм в кюветах с рабочим расстоянием 10 мм.

Схема определения глюкозы в сыворотке крови

источник

Набор реагентов для определения содержания глюкозы в сыворотке и плазме крови

В основном, концентрация глюкозы в сыворотке или плазме измеряется для диагностики и на­блюдения за ходом лечения диабета. Другие применения – это определение неонатальной гипогликемии, исключение панкреатической оча­говой клеточной карциномы, а также оценка уг­леводного метаболизма при различных болез­нях.

Ферментативный фотометрический тест «GOD-PAP» с использованием глюкозооксидазы.

Определение глюкозы ферментативным окисле­нием в присутствии глюкозооксидазы (ГОД). Ок­рашенный индикатор хинонимин образуется из фенола и 4-аминоантипирина под действием пероксида водорода при каталитическом воз­действии пероксидазы (ПОД) (реакция Трин­дера) [3].

Глюкоза + O2 Глюконовая кислота + H2O2

2H2O2 + 4-Аминоантипирин + Фенол

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

Реагент стабилен до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С, в за­щищенном от света месте. Не допускать загряз­нения. Не замораживать реагент!

Примечание: Необходимо упомянуть, что случайные изме­нения окраски не влияют на точность измерения, если оптическая плотность реагента меньше 0,3 при 546 нм.

Калибратор стабилен до конца месяца, указанного в сроке годности, при температуре 2–25°С.

1. В качестве консерванта реагент содержит азид натрия (0,95 г/л). Не глотать! Избегать кон­такта реактива с кожей и слизистыми.

2. Предпринимать меры предосторожности, обычные при работе с лабораторными реакти­вами.

В соответствии с местными правилами.

Реагент и калибратор готовы к использованию.

Необходимые материалы, не включенные в набор

• Гепаринизированная или ЭДТА плазма.

Отделите от форменных элементов не позднее, чем через 1 ч после забора крови.

Стабильность после добавления ингибиторов гликолиза (фториды, монойодацетат, манноза) [4]:

Стабильность без добавления ингибиторов гликолиза [2,5]:

Загрязненные образцы хранению не подлежат.

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно

относительно холостой пробы

Для калибровки автоматизированных фотомет­рических систем рекомендуется мультикалибратор TruCal U фирмы DiaSys. Для внутреннего конт­роля качества с каждой серией образцов прово­дите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.

Тест разработан для определения концентраций глюкозы в диапазоне измерения от 1,0 до 400 мг/дл (0,06-22,2 ммоль/л). Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, образец должен быть разве­ден 1 + 4 изотоническим раствором NaCl (9 г/л) и полученный результат должен быть умножен на 5.

аскорбиновая к-та до 15 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл, гемоглобин до 200 мг/дл и липемия до 2000 мг/дл триглицеридов не влияют на точ­ность анализа.

Нижний предел определения 1,0 мг/дл (0,06 ммоль/л).

(t = 37°C, число измерений n = 20)

Среднеарифметическое значение, ммоль/л

1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 131-137.

2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadel­phia: W. B Saunders Company; 1999. p. 750-808.

3. Barham D, Trinder P. An improved color reagent for the determination of blood glucose by the oxidase system. Analyst 1972; 97: 142-145.

4. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 30-1.

5. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK, Mc Donald JM, Parrott M. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-72.

Разрешено к обращению на территории Российской Федерации РУ № ФСР 2011/11590

Система менеджмента качества сертифицирована на соответствие требованиям: ISO 9001:2008, EN ISO 13485:2012, ГОСТ ISO 9001-2011, ГОСТ ISO 13485-2011

Допущено к обращению на территории Европейского Союза

Авторизованный представитель АО «ДИАКОН-ДС» в ЕС

ESDOORNLAAN 13, 3951DB MAARN, THE NETHERLANDS

«DiaSys Diagnostic Systems GmbH», Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany. Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany.

источник

Тема: Клинико-биохимическая лаборатория

Казань – 2016

Перечень приборов………………………………………………………….
Перечень оборудования……………………………………………………….
Список посуды………………………………………………………….
Список реактивов………………………………………………………….
Методика для определения глюкозы в крови………………………………..
Оборудование и мебель……………………………………………………….
Перечень приказов………………………………………………………….
Площадь лаборатории…………………………………………………………
Энергообеспечение……………………………………………………………
Водообеспечение………………………………………………………….
Поверка приборов………………………………………………………….
График средств измерений………………………………………………………….
Список журналов………………………………………………………….
Аттестация сотрудников………………………………………………………
Сотрудники лаборатории……………………………………………………
Должностные инструкции…………………………………………………….
Аккредитация лаборатории………………………………………………….
Пробоотбор. Хранение проб………………………………………………….
Утилизация отходов………………………………………………………….
Инструкция по охране труда при работе в клинико-диагностических лабораториях………………………………………………………………………….
Правила безопасности хранения химических реактивов
Акт результатов анализа………………………………………………………
Схема лаборатории………………………………………………………….
Схема размещения мебели, приборов и т.д.…………………………………
Схема пожарной безопасности……………………………………………….

Список исполнителей

Руководитель проекта:
Студент 01-540-3 гр. каф. БиБ ___________ подпись, дата М. Ж. Ле
Исполнители проекта:
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Х.Т. Чан
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Ж. Данияров
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Л. Зенкова
Студент 01-540-5 гр. каф. ФиКФ _____________ подпись, дата Т.Л. Динь

Перечень анализов

Названия анализов Количество анализов/день Цены (руб.)
1 2 3
1. Гематологические исследования
1.1. Общий анализ крови CBC
1.2. Общий анализ крови CBC/Diff, с лейкоцитарной формулой (5 фракций лейкоцитов)
1.3. Лейкоцитарная формула (микроскопия)
1.4. Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ)
1.5. Ретикулоциты
1.6. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
2. Коагулологические исследования (гемостаз)
2.1. Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ)
2.2. Определение протромбиновое (тромбопластиного) времени в крови
2.3. Определение протромбина по Квику (ПТИ) в крови
2.4. МНО (международное нормализированном отношении)
2.5. Исследование уровня фибриногена в крови
2.6. Исследование Д-димера в крови
2.7. Определение тромбинового времени в крови
2.8. Исследование уровня протеина С в крови
2.9. Исследование уровня антитромбина IIIв крови
2.10. Исследование агрегации тромбоцитов (спонтанная)
2.11. Исследование агрегации тромбоцитов стимулированная АДФ
2.12. Исследование агрегации тромбоцитов стимулированная коллагеном
2.13. Исследование агрегации тромбоцитов стимулированная ристоцетином
3. Биохимические исследования крови
3.1. Альбумин
3.2. Общий белок
3.3. Белковые фракции (электрофорез)
3.4. Креатинин
3.5. Креатинин + мочевина + альбумин + СКФ (MDRD)
3.6. Мочевина
3.7. Мочевая кислота
Продолжение таблицы
1 2 3
3.8. Миоглобин
3.9. Тропонин I
3.10. Гомоцистеин
3.11. CRP
3.12. Альфа1- кислый гликопротеин
3.13. Антистрептолизин О
3.14. Ревматоидный фактор
3.15. Церулоплазмин
3.16. Катионный протеин эозинофилов
3.18. C3 – компонент комплемента
3.19. C4 – компонент комплемента
3.20. Иммуноглобулины A (IgA)
3.21. Иммуноглобулины M (IgM)
3.22. Иммуноглобулины G (IgG)
3.23. Иммуноглобулин E (IgE)
3.24. Глюкоза
3.25. Гликозилированный гемоглобин (HbA1c)
3.26. Фруктозамин
3.27. Глюкозотолерантный тест
3.28. Лактат (молочная кислота)
3.29. Холестерин
3.30. Холестерин-ЛПВП (липопротеинов высокой плотности)
3.31. Холестерин-ЛПНП (липопротеинов низкой плотности)
3.32. Триглицериды
3.33. Аполипопротеин A1
3.34. Аполипопротеин B
3.35.Липопротеин (а)
3.36. Липидограмма
3.37. Билирубин общий
3.38. Билирубин прямой
3.39. Билирубин и его фракции: общий, прямой (связанный), непрямой (свободный)
3.40. Альфа-амилаза панкреатическая
3.41. ГГТП (гамма-глутамилтранспептидаза)
3.42. ЛДГ (лактатдегидрогеназа)
3.43. Липаза
3.44. Креатинкиназа (CK)
3.45. Холинэстераза
Продолжение таблицы
1 2 3
3.46. Кислая фосфатаза
3.47. Простатическая кислая фосфатаза (PAP)
3.48. Щелочная фосфатаза
3.50.Калий/Натрий/Хлориды
3.51. Кальций общий
3.52. Кальций ионизированный
3.53. Фосфор неорганический
3.54. Магний
3.55. Цинк
3.56. Медь
3.58. Комплексный анализ сыворотки крови на наличие тяжелых металлов и микроэлементов
3.59. Железо
3.60. Латентная железосвязывающая способность сыворотки (ЛЖСС)
3.61. Общая железосвязывающая способность сыворотки
3.62. Трансферрин
3.63. Насыщение трансферрина железом (TS)
3.64. Ферритин
3.65. Витамин А (ретинол)
3.66. Витамин C (аскорбиновая кислота)
3.67. Витамин D (кальциферол)
3.68. Витамин E (токоферол)
3.69. Витимин К (филлохинон)
3.70. Витамин B1 (тиамин)
3.71. Витамин B2 (рибофлавин)
3.72. Витамин B3 (ниацин)
3.73. Витамин B5 (пантотенова кислота)
3.74. Витамин B6 (пиридоксин)
3.75. Витамин B12 (цианкобаламин)
3.76. Антитела к внутреннему фактору
3.77. Фолиевая кислота
4. Биохимические исследования мочи
4.1. Глюкоза мочи
4.2. Белок мочи
4.3. Альфа-амилаза в моче
4.4. Альфа-амилаза панкреатическая в моче
4.5. Альбумин в моче (микроальбуминурия)
Окончание таблицы
1 2 3
4.6. Бета-2-микроглобулин в моче
4.7. Комплексный анализ мочи на наличие тяжелых металлов и микроэлементов
4.8. Свинец (Pb) в моче
4.11. Креатинин в моче
4.12. Мочевина в моче
4.13. Мочевая кислота в моче
4.14. Калий/Натрий/Хлориды в моче
4.15. Кальций в моче
4.16. Фосфор в моче
4.17. Магний в моче
4.18. Медь в моче
4.19. Кортизол в моче
4.20. Кортизол свободный в моче
4.21. Комплексный анализ метаболитов адреналина, норадреналина, дофамина, серотина (ГВК, ВМК, 5-ОИУК) (моча)
4.22. Анализ мочи на содержание промежуточных метаболитов катехоламинов: метанефрин, норметанефрин
4.24. Стероидный профиль мочи

Перечень приборов

Оборудование Марка оборудования
Прибор для определения времени коагуляции Thrombolyser Sysmex X-300
Двухканальный лазерный анализатор Thrombotimer 4
Центрифуга многофункциональная 5702R
Дистиллятор GFL-2012
Персональный вортекс V-1 plus
Весы аналитические Sartorius Cubis
Автоматическая станция по преаналитическому отбору и подготовке образцов крови FE 500 pro
Автоматический биохимический анализатор с ионселективным блоком AU-680, Beckman Coulter (США).
Автоматическая электрофоретическая система SAS-1 Plus/ SAS-2, Helena Bioscience Europe (Великобритания)
Автоматизированная система для иммуногематологических исследований с помощью гелевых ID-карт Swing&Saxo, DiaMed (Швейцария).
Автоматический анализатор мочи H-800, Dirui (KHP).
Автоматический гематологический комплекс XEAlphaN, SysmexCor. (Япония).
Анализатор электролитов EASYLYTE PLUS Na/K/Cl, Medica Corp. (США).

Список посуды

Наконечники без фильтра до 1000мкл;

Наконечники без фильтра до 200мкл;

Наконечники без фильтра до 10 мкл;

Наконечники без фильтра до 5мл;

Штатив «раболее место» для микропробирок на 1,5 мл, 5х10 мест;

Штатив-карусель для пипеток Eppendorf;

Подставки для наконечников до 1000мкл; до 200 мкл; до 10мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 2-20 мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 20-200 мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 100-1 000 мкл;

Автоматический дозатор переменного объёма Reference ® с фильтром 500-5000 мкл;

Пробирки Vacuette с натрия цитратом 3,2% с двойной стенкой;

Контейнер круглый для транспортировки 12 пробирок D (9-16) мм (Greiner);

Игла-бабочка Vacuette 23Gх3/4″ с луэр-адаптером и держателем;

Микропробирки для гемостаза;

Цилиндр с пробкой до 100 мл;

Колба Эрленмейера (коническая);

BFA/BCT Система для размещения образцов 6х10 роторов по 32 кюветы (с мешалками);

Чашка для сбрасывания наконечников (4 шт);

Список реактивов

№ п/п Наименование реактивов Ед. Количество
день 1/10 1/100 г/год
Набор реактивов для определения АЛТ в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения АСТ в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения мочевины в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения креатинина в сыворотке крови в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор для определения концентрации калия в сыворотке крови турбидиметрическим методом без депротоинизации с татрафенилборатом-100мл шт.
Линейность до 10 ммоль/л Отклонение от линейности не более 7% Время инкубации 5 минут Чувствительность 1 ммоль/л
Набор реагентов для определения концентрации мочевой кислоты ферментативным методом по конечной точке- 100мл Линейность до 1200 мкмоль/л Чувствительность 35 мкмоль/л Коээф. вариации не более 5% шт.
Набор для определения концентрации глюкозы в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом– 1000мл Линейность до 20 ммоль/л Чувствительность 0,5 ммоль/л шт.
Продолжение таблицы
Набор для определения активности α- амилазы кинетическим методом в сыворотке крови и моче- 200 опред. Линейность до 1100 ммоль/л Чувствительность 16 Е/л Коэф. вариации не более 5% шт.
Набор реактивов для определения протромбинового времени на коагулометре Start 4 (Roche) 6 х15 мл шт.
Набор реактивов для определения АПТВ (АЧТВ) на коагулометре Start (Roche) 6 х5 мл в цитратной плазме. Реагент из мозговых фосфолипидов в забуференной суспензии каолина. Тест мало чувствителен к волчаночных антикоагулянтов. шт.
Шарики для коагулометра Start 4 уп.
Кюветы (стрипы по 4 шт.) одноразовые для коагулометра Start 4 шт.
Скарификаторы одноразовые стерильные уп.
Стекло предметное 25×75×1 шт.
Термобумага для анализатора Clina МС-15 110×50×12 уп.
Стекло покровное 18 х 18 уп.
Тест полоски для определения глюкозы в крови для портативного глюкометра «Сателлит» уп.
Планшет 96- луночный круглодонный (U-образный) шт.
Кислота уксусная ледяная х/ч кг
Набор реактивов для определения уровня общего белка в сыворотке крови в сыворотке крови на биологическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Капиляры Панченкова (СОЭ) шт.
Раствор красителя по Романовскому л
Набор реагентов для определения содержания гемоглобина в кров шт.
Продолжение таблицы
Раствор бриллиантового крезилового синего для окраски ретикулоцитов 50 мл шт.
Тест полоски для определения белка в моче полуколичественным методом уп.
Наконечники для автоматических дозаторов 300мкл уп.
Наконечники для автоматических дозаторов 1000мкл уп.
Аппарат (штатив) СОЭ-метр (Панченкова) без капилляров шт.
Набор для определения глюкозы в крови по конечной точке колориметрическим энзиматическим методом 100 опред. шт.
Набор реагентов для определения протромбинового времени со стандартизированным растворимым кроличьим тромбопластином с кальцием на 100 определений Линейность в диапазоне от 12 до 110 сек Коэф. вариации не превышает 6% Допустимый разброс результатов определения протромбинового времени в одной пробе плазмы крови разными наборами одной серии не превышает 10% Международный индекс чувствительности тромбопластина-1,25 шт.
Набор реагентов для определения протромбинового времени со стандартизированным растворимым кроличьим тромбопластином с кальцием на 40 определений Линейность в диапазоне от 12 до 110 сек Коэф. вариации не превышает 6% Допустимый разброс результатов определения протромбинового времени в одной пробе плазмы крови разными наборами одной серии не превышает 10% Международный индекс чувствительности тромбопластина-1,25 шт.
Продолжение таблицы
Набор реагентов для определения активированного парциального (частичного) тромбопластинового времени (АПТВ/ АЧТВ) АВР и ЧТВ на 100 определений Линейность определения в диапазоне от 30 до 300 сек. Коэф. вариации результатов определения АПТВ не превышает 6%; Допустимый разброс результатов определения АПТВ в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10% Тест чувствительности к присутствию в крови антикоагулянтов шт.
Набор реагентов для определения гемоглобина в крови гемихромным методом с калибратором для фотометра «Микролаб 540» Чувствительность 25 г/л Коэф. вариации не больше 2% Результаты контроля соответствуют 1,5%, аттестованное значение концентрации гемоглобина в калибраторе 139,8 г/л шт.
Камера Гаряева (двухсеточная) шт.
Цоликлон анти А фл.
Цоликлон анти В фл.
Цоликлон анти Д-супер фл.
Антиген кардиолипиновый для реакции микропреципитации уп.
Набор контрольных растворов гемоглобина 3-х концентраций (низкий, средний, высокий) с известным значением шт.
Набор для определения мочевины в сыворотке крови кинетическим методом 100 определений шт.
Набор красителей для окраски мазков по Граму (с сафронином) шт.
Продолжение таблицы
Набор реактивов для определения общего билирубина в сыворотке крови на биологическом анализаторе Кобас С 111 на 400 тестов шт.
Набор реактивов для определения прямого билирубина в сыворотке крови на биологическом анализаторе Кобас С 111 на 100 тестов шт.
Депротеинизатор для биохимического анализатора Кобас С 111 шт.
Кюветы измерительные для биохимического анализатора Кобас С 111 уп.
Вода деионизированная 5л в бутылке бут.
Натрий лимоннокислый 3-х зам., ч. кг
Стекло покровное 24 х 24 ( уп. 100шт.) уп.
Набор реактивов для определения активности АЛТ в сыворотке крови кинетическим методом 100 определений уп.
Набор реактивов для определения активности АСТ в сыворотке крови кинетическим методом 100 определений уп.
Набор реактивов для определения билирубина (общий+прямой) 600мл шт.
Набор реактивов для определения С-реактивного белка в реакции агглютинации латекса-250 определений шт.
Креатинкиназа МВ фракция метод с иммунным ингибированием с последующим ферментативным определением креатинкиназы 60мл, кинетика, Линейность до 2000 Е/л шт.
Набор для определения активности лактатдегидрогеназы 125мл кинетическим методом. Линейность до 2300 Е/л. Отклонение от линейности – не более 5%. шт.
Набор для определения уровня общего белка в сыворотке крови биуретовым методом 1000мл. шт.
Продолжение таблицы
Контрольная сыворотка лиофилизированная универсальная на основе человеческой сыворотки с известными значениями в области нормы- 30мл. шт.
Контрольная сыворотка лиофилизированная универсальная на основе человеческой сыворотки с известными значениями в области патологии 30мл. шт.
Термобумага 57х20 без сетки шт.
Набор для определения щелочной фосфотазы оптимизированный стандартный кинетическим методом 200 определений шт.
Набор для определения глютамилтранспептидазы (ГГТП) кинетическим методом. Коэфф.вариации не менее 5%. Линейность 200 Е/л. Чувствительность 5% уп.
Тест-полоски для анализатора мочи ClinitecStatus Чувствительность: белок-0,15-0,3 г/л протеина; кровь-150-620 мкг/л гемоглобина; лейкоциты-5-15 телец/мкл в клиническом образце; нитриты 13-22 мкм/л нитрит иона; глюкоза 4-7 ммоль/л глюкозы; кетон 0,5-1,0 ммоль/л ацетоукс.кислоты; билирубин-7-14мкмоль/л биллирубина уп.
Тест-полоски для анализатора мочи «Лаура» Smart Нитриты-0,8г/л; белок-0,22 г/л; глюкоза-1,7ммоль/л; кетоны 0,3 ммоль/л; уробилиноген 13,5 мкмоль/л; билирубин-13,7 мкмоль/л; Le-20в мкл.; кровь 5эр.в мкл. уп.
Шпатель для языка одноразовый стерильный деревянный уп.
Продолжение таблицы
Тропанин Т (10 тестов) уп.
Набор реактивов для определения сывороточного альбумина в сыворотке крови с бромкрезоловым порпурным в ацетатно-фосфатном буфере 200мл Кофф. Вариации не менее 4% шт.
Кюветы для анализатора Clima МС-15 уп.
Набор реактивов для определения сывороточного железа на 100 опр. шт.
Камера Фукса-Розенталя шт.
Желатин 10% для опр.резус-фактора уп.
Респираторы «3М» 9322 с клапаном шт.
Набор иммунохроматографических тестов для качественного определения малярийного антигена на 25 опр. шт.
Укладка контейнер лабораторный со штативом УКП-50-1 шт.
Раствор красителя пиррогалового красного для определения белка в моче фотометрическим методом- 500мл. шт.
Стекло покровное к камере Горяева шт.
Пипетка Сали прецизионная, 20 мкл шт.
Карандаш-маркер по стеклу шт.
Карандаш по стеклу (красный) уп.
Пипетка автоматическая переменного объема (дозатор) 100-1000мкл шт.
Пипетка автоматическая переменного объема (дозатор) 5-50мкл шт.
Холестерин ЛПВП (осадитель) осаждающий реагент и стандарт для использования совместно с набором для определения общего холестерина уп.
Набор реактивов для определения общего холестерина сыворотки крови ферметативным методом с липидпросветляющим фактором (АЛФ) линейность до 19,3 ммоль/л; 3 х 250 монореагент уп.
Окончание таблицы
Набор реактивов для определения триглицеридов в сыворотке крови ферметативный колометрический тест 3 х250 мл монореагент линейность до 11,4 ммоль/л уп.
Набор регентов для обнаружения, яиц гельминтов методом толстого мазка (метод Като) уп.
Набор реагентов для определения скрытой крови в кале уп.

Методика для определения глюкозы в крови

Нормальное содержание глюкозы в крови показано в таблице:

Возраст Нормальное содерхжание, ммоль/л
в плазме, натще в сыворотке крови, натще
Новорожденные 1,7 — 4,2 2,6 — 4,2
Дети от 6 недель до 2 лет 3,3 — 5,4
Дети от 6 недель до 15 лет 3,3 -5,4
Взрослые (мужчины, женщины) 3,9 — 5,6 3,9 — 5,6

Необходимые реактивы для определения глюкозы глюкозооксидазным методом

1. Натрия хлорида 9 грамм/литр (изотонический раствор): готовят, раст­воряя 0,9 г NaCl в 100 мл воды.

2. Цинка сульфат, 50 г/л: 5 г сульфата цинка (ZnSO4) растворя­ют в воде, объем доводят до 100 мл.

3. Натр едкий, 0,3 моль/л: готовят, растворяя 1,2 г NaOH в 100 мл воды, концентрацию проверяют титрованием (она должна быть 0,3 н).

4. Ортотолуидин, 1%-ный раствор: 1 г препарата растворяют в 100 мл абсолютного спирта. Раствор можно хранить в холодиль­нике в склянке с притертой пробкой несколько месяцев. Имею­щийся в продаже препарат можно очистить перекристаллизацией, для чего его растворяют в абсолютном спирте, добавляют воду и выпавшие кристаллы отсасывают на фильтре, затем сушат над хлоридом кальция.

5. Ацетатный буферный раствор рН 4,8: смешивают 4 части 0,25 н уксусной кислоты (проверить титрованием) и 6 частей 0,25 н ацетата натрия (содержит 34 г CH3COONaX ЗН2О в 1 литре).

6. Глюкозооксидаза — сухой препарат активностью 3000 ед/мг или больше.

7. Пероксидаза из хрена. 1 мг растворяют в 5 мл ацетатного буфера, в холодильнике можно хранить не­сколько дней.

8. Рабочий реактив: в 80 мл ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолуидина, перемешивают и доводят объем буферным раствором до 100 мл. Рабочий реактив должен быть прозрачным, бесцветным или иметь слабо-зеленый оттенок, в этом случае он устойчив при хранении на холоде. Если же окраска интенсивна или через несколько часов после приготовления начи­нает выпадать осадок, это значит, что ортотолуидин недостаточ­но чистый и его надо перекристаллизовать.

9. Калибровочные растворы глюкозы. Глюкозу предваритель­но высушивают при температуре 37°С и хранят в эксикаторе. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мг вещества растворяют в 20 мл насыщенного раство­ра (примерно 0,3%-ного) бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 3; 6; 9; 12; 15; 18 и 21 ммоль/л, для чего берут 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3; 3,6 и 4,2 мл основного раствора и доводят насыщенным раствором бензойной кислоты до объема 10 мл. Эти растворы содержат глюкозу в тех же концентрациях, в которых она бывает в крови, что облегчает расчеты при калибровке.

Ход определения глюкозы глюкозооксидазным методом

В центрифужные пробирки вносят 1,1 мл раствора хлорида натрия, 0,4 мл раствора сульфата цинка и 0,4 мл 0,3 н раствора NaOH, перемешивают; при этом образуется очень тонкий гель гид­рата окиси цинка, в него выпускают 0,1 мл крови или калибровоч­ного раствора, снова перемешивают и через 10 минут центрифуги­руют при скорости 3000 об./мин в течение 10 минут.

К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл рабочего реак­тива и осторожно перемешивают.

Постепенно начинает развиваться окраска, которая при обычной комнатной температуре достигает максимума через 13-15 минут, а затем постепенно умень­шается. Фотометрируют всегда через один и тот же промежуток времени после добавления рабочего реактива в кюветах с длиной оптического пути 1 сантиметр с красным светофильтром (длина волны 625 нм) против холостого опыта, который ставят одновременно с рабочими пробами, но вместо крови берут физиологический раствор хлорида натрия.

При приготовлении калибровочного гра­фика вместо проб крови берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора.

Расчет уровня глюкозы можно проводить по правилу пропорций или по калиб­ровочному графику, для построения которого на одной оси откла­дывают концентрацию глюкозы (ммоль/л), а на другой — величи­ну экстинкции.

Примечания к методика определения глюкозы глюкозооксидазным методом

1. Можно сначала выпустить кровь из пипетки в изотониче­ский раствор хлорида натрия, а затем добавить растворы сульфа­та цинка и NaOH.

2. При систематической работе нет необходимости постоянно строить калибровочный график по всем точкам, достаточно еже­дневно обрабатывать холостую пробу и 2-3 точки в диапазоне 3-9 ммоль/л, а полный калибровочный график строить лишь при смене реактивов или налаживании методики.

источник